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公司新聞

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細菌FISH:培養細菌和組織標本
作者:Exonlab 發布于:2022/11/13 11:30:08 點擊量:

                                      細菌原位雜交:培養細菌和組織標本

培養后的細菌原位雜交:

(1)       細菌FISH探針的濃度為25-60μg/ml,即大約5-25μM濃度,雜交液稀釋20-50倍。

(2)       將菌株震蕩混合10秒,用鉆石筆在玻璃上畫圈,利用移液槍滴加50μL的細菌,并將載玻片置于37℃或室溫干燥后1-24小時。

(3)       利用梯度乙醇濃度(50%,85%95%)脫水,每次3分鐘。在100%乙醇中脫水后,將載玻片風干,約1-60分鐘。

(4)       雜交液稀釋細菌探針(1:50)。取50μL探針溶液加在玻片上,加玻片,多出溶液用紙巾擦拭。放入孵育盒,然后蓋好密封蓋,避光48°C中雜交5小時或37℃過夜。

(5)       配置洗滌緩沖液(700mM NaCl 72 mL, 17mM Tris/HCl,0.1% SDS),在46°C37℃的水浴中浸泡30分鐘。

(6)       再利用純水浸泡10分鐘,去除多余的鹽分。每片加50μL 抗熒光淬滅劑DAPI,室溫避光靜置20分鐘。熒光顯微鏡下,觀察結果,拍照。

 

新鮮組織的細菌原位雜交:

(1)       取材新鮮活體組織,使用卡氏固定液,固定3-12小時。石蠟包埋,切片5-8μM。

(2)       二甲苯中浸泡2次,10分鐘每次,在梯度乙醇50%,80%95%中,按順序脫水,每次3分鐘,晾干標本,約1-2小時。

(3)       將雜交液與探針按照25:1稀釋細菌探針。取50μL探針溶液加在玻片上,加玻片,紙巾擦拭干凈。放入保濕孵育盒,封蓋,避光48°C中雜交5小時,或37℃過夜。

備注:如果是陳舊標本需要使用細菌原位雜交試劑進行處理,如需要,請聯系我們。

(4)       洗滌緩沖液(700mM NaCl 72 mL, 17mM Tris/HCl,0.1% SDS),在46°C37℃的水浴中浸泡30分鐘。

(5)       再利用純水浸泡10分鐘,去除多余的鹽分。每片加50μL 抗熒光淬滅劑DAPI,室溫避光靜置20分鐘。觀察結果。

(6)       40倍或60倍或100倍熒光顯微鏡下觀察,拍照。

 

如果遇到更多問題,請聯系我們。我們提供探針、試劑盒、耗材、設備等等。

聯系電話:020-89895006  180 1199 7127(24小時值班電話)  E mailfocobio@126.com





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