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操作指南

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蛋白酶熒光檢測試劑盒 V1

貨號: 001.41          試劑盒:100 T       運輸:4℃, 儲存:20

產品描述:蛋白酶熒光檢測試劑盒是即用型,簡單便捷。主要檢測蛋白酶活性的存在, 原理是利用異硫氰酸熒光素 (FITC) 標記的酪蛋白作為底物,熒光被淬滅,蛋白降解后,釋放熒光。本試劑盒可檢測多種蛋白酶。適用于檢測絲氨酸、半胱氨酸、金屬和天冬氨酸蛋白酶等。蛋白酶降解導致FITC標記的酪蛋白底物裂解成更小的片段,在酸性條件下這些片段處于溶解狀態。測量FITC標記片段的熒光,激發波長:485 nm,發射波長:535 nm,間接反映酶的存在。靈敏度:所述試劑盒程序檢測濃度為 50ng每個反應

試劑盒組成:

A:蛋白酶反應緩沖液2X5ml

B:三氯乙酸 (TCA) 溶液10X5mL  6.1 N

C:異硫氰酸熒光素 (FITC)100ul

D:陽性對照:胰蛋白酶,20 mg

步驟:

1. 對于每個測試樣品,將 40 uL 孵育緩沖液與10-40uL 測試樣品加入微量離心管中。對于具有高蛋白酶活性的測試樣品,可能需要進行樣品稀釋。

2. 陽性對照樣品:向微量離心管中加入 40 µL 孵育緩沖液、和 10 µL 胰蛋白酶對照樣本,制備適當的對照樣本(參見對照樣本)。

3. 空白對照:向微量離心管中加入 40uL孵育緩沖液,10-40uL超純水,制備空白樣品。

4. 輕輕混合,因為過度的湍流可能會導致高熒光背景并降低檢測的靈敏度。 觀察熒光變化。最長孵育至 24 小時,可提高靈敏度。注意不要超過 24 小時,因為 FITC-酪蛋白可能開始降解,導致高熒光增高。

5. 孵育后,向每個微量離心管中加入40μL1X TCA 溶液。

6. 輕輕混合并在 37°C 避光孵育 30 -60分鐘。

7熒光測量:熒光定量PCR儀,熒光檢測儀,熒光酶標儀均可。在 485 nm 處激發的熒光強度并監測 535 nm 的發射波長。

8.檢測限:產生顯著熒光讀數高于空白樣品所得值的蛋白酶量,通常是50ng。

9.讀數等于用空白樣品獲得的值的 1.2倍 被認為陽性。

10.將胰蛋白酶對照溶液配制成20mg/ml,即1ug/uL。再得到10ng/ul 的對照溶液,加入5uL。

11.異硫氰酸熒光素作為可能的儀器校準或確定 FITC 信號的線性范圍的對照。

注意事項:僅供研發使用, 不用于藥物、診斷或其他用途。





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