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操作指南

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外顯子生物蛋白標記試劑盒問答
作者:Exonlab 發布于:2022/9/28 16:34:06 點擊量:

外顯子生物蛋白標記試劑盒問答(V3)

1.你們提供蛋白、抗體、熒光標記嗎?有幾種熒光標記方法?

答:兩種,一種是氨基偶聯方法試的劑盒,染料含有琥珀酰乙酯(SE)或四氟苯基酯部分,可與蛋白質的伯胺有效反應形成穩定共軛。另外一種方法是采用快速抗體熒光標記試劑盒。

前者需要去除氨基溶液和BSA等雜質,時間10小時。后者不需要去除氨基溶液,時間2-4小時。規格均是5人份。但后者不適合少部分蛋白。

2.蛋白質標記試劑盒的熒光有哪些?

答:天藍(DEAC),熒光素,FITC,EF488,Cy3,Cy5,Cy7,Cy3.5,Cy5.5,羅丹明,德克薩斯紅等。

3.對抗體的量和分子量大小有要求嗎?

答:試劑盒經過優化,每次反應可標記10ug-1mg IgG抗體和相當數量的其他抗體

或蛋白質,其分子量必須大于25 kDa。

4.對抗體溶液和pH值有要求嗎?

答:對pH值在410緩沖液抗體,均可以標記。

5.標記熒光的抗體,可用于哪些應用?

答:免疫熒光,流式細胞術,Western blotting, ELISA,FISH共定位,免疫蛋白共定位。但是,有些與抗體本身有關。因此,不能確保100%有效。如果標記失敗,按照35%費用。

6.蛋白或抗體熒光有什么注意事項?

答:為得到較好標記效率,所標記的抗體或蛋白質必須不含伯胺。通過透析或其他方法,我們可以協助您解決。不純的蛋白質,例如粗血清、粗制備的抗體將不能很好地標記。值得注意的是在低濃度疊氮化鈉或硫柳汞(≤1 mM)不會干擾反應。所標記蛋白或抗體IgG溶液應該大于2 mg/mL,低于該濃度需要濃縮。其次,抗體和蛋白純化的過程不完全一樣,具體問題具體分析或咨詢我們focobio@126.com。

7.能否提供標記說明書?

答:如下。

熒光標記抗體試劑盒(001)具體步驟:

(1) 取出試劑盒內的碳酸氫鈉溶液(1M,pH9.0),室溫備用。

(2) 如果蛋白質濃度大于2mg /mL,則蛋白質應在適當的緩沖液中稀釋至2毫克/毫升(PBS0.1 M碳酸氫鈉。

(3)0.2-0.5 mL2mg /mL蛋白溶液中,加入1/10體積(20-50 μL)的1 M碳酸氫鹽。

(4)取出染料加熱到室溫平衡,將蛋白質溶液加到反應瓶中染料。均勻混合使染料完全溶解。攪拌反應混合物室溫下1小時。

(5)純化:取出純化柱,離心1分鐘,丟棄離心液,加入抗體,再離心1分鐘,獲得抗體。

熒光標記抗體試劑盒(002)具體步驟:

(1)取出試劑盒內的熒光標記試劑管,3分鐘室溫平衡備用。

(2) 蛋白質或抗體緩沖液要求不嚴格,甚至有甘油均可,用試劑盒提供的稀釋液試劑管稀釋至100uL,如抗體是30uL,加入稀釋液70uL。

(3)將熒光標記試劑管,加入到2步驟康體內,室溫1-2小時。

(4)純化:取出試劑盒純化柱,離心1分鐘,丟棄離心液,加入抗體,重復離心,獲得抗體。

如果您在標記中或使用產品中,有任何疑問,請聯系我們 focobio@126.com

 

附產品信息

Cat.

Name

Size

Price

Storage

001.901

熒光標記抗體試劑盒-001

10T

950

2-8

001.092

熒光標記抗體試劑盒-002

10T

950

2-8

 




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