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操作指南

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堿性磷酸酶(ALP/AP)熒光檢測試劑盒
作者:Exonlab 發布于:2023/4/10 8:08:01 點擊量:

Cat: CE001   Store-20    Size100T   Price:310    

 

產品介紹:

堿性磷酸酶(ALP)在堿性環境中催化磷酸酯的水解,會導致自由基和無機磷酸鹽的形成。在哺乳動物中,ALP酶主要存在于肝臟、骨骼和腎臟中。血清ALP水平顯著升高,稱為高堿性磷酸酶血癥,該變化與惡性膽道梗阻、原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎、肝淋巴瘤和結節病相關。

本試劑盒適用于科學研究和藥物開發。堿性磷酸酶檢測試劑盒可直接測定血液、尿液等其他生物樣品中的ALP活性,無需預處理。利用ALP水解對硝基苯基磷酸,生成淡黃色產品,在波長405 nm有最大吸光度。分光光度變化的反應速率與酶活性成正比。該測定方法檢出最低為2U/L, 線性范圍可達800 U/L,當樣品ALP活性超過800 U/L時,用PBS稀釋樣品,結果乘以稀釋倍數。對于ALP活性低的樣品,培養時間可延長至4 min以上。參考值ALP活性(U/L)人血清為12.42,大鼠血清為190+2.0,羊血清為202.8+4.5.

 

產品適用

本試劑盒適用于血清、血漿、唾液、骨髓等堿性磷酸酶活性的檢測。

 

試劑盒組分:250T

1)檢測緩沖液(pH 10.5)       50 mL

2)醋酸鎂 (0.2 M)           1.5 mL

3pNPP 底物 (1 M)          600μl

4)校準劑檸檬黃             10 mL

所需的設備:移液槍,熒光儀或酶標儀、透明平底96孔板、1.5 mL離心管、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、Triton-100,可以在96孔板中進行檢測,

 

樣品前期處理:

1ALP4℃可穩定48小時,在20℃可穩定2個月。

2EDTA,草酸鹽,氟化物和檸檬酸鹽是已知的ALP抑制劑,在樣品制備中應避免使用。

3)血清、血漿(不含EDTA/檸檬酸鹽,理想情況下為未溶血)和細胞培養基可直接測定。

4)細胞裂解物:105細胞PBS洗滌,溶解在0.5 mL 0.2% Triton X-100,孵育20分鐘。

5)將5~50μl樣品轉移到透明平底96孔板的適當孔中。

 

工作試劑的制備:

1)試劑:分析緩:200 uL + 醋酸鎂 (0.2 M) 5μL + pNPP液體(1 M) 2μL;

2)將200 μ純凈水(空白組)200 μ Calibrator分別轉入96孔板的不同組中;

3)移管150 ~ 195 uL工作試劑到樣品孔。樣品孔的最終反應容積應為200 uL;

4)輕輕拍打盤子攪拌。

5)立即在405nm處利用酶標儀讀取光密度,4分鐘后在酶標機上再次讀取。




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